pH值升高都有哪些原因?
①隨著培養(yǎng)基開蓋時間的增長,pH值會不斷升高;
---培養(yǎng)基中CO2揮發(fā),導(dǎo)致溶液堿性升高。
②培養(yǎng)基存儲條件不合適;
③操作時間過長。
如何解決pH值升高的問題?
①*培養(yǎng)基盡量現(xiàn)配現(xiàn)用,2~8℃下保存一周內(nèi)使用完;
②培養(yǎng)基在2~8℃下避光保存;
③避免操作時間過長。操作時間快速、減少同時進(jìn)行的實驗數(shù)量。
pH值降低都有哪些原因?
①在細(xì)胞生長過程中,產(chǎn)生細(xì)胞代謝產(chǎn)物乳酸,乳酸蓄積,pH值通常會下降;
②培養(yǎng)瓶蓋擰得過緊;
---細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2無法溢出,溶解于培養(yǎng)基中導(dǎo)致酸性變強(qiáng)。
③NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠;
④細(xì)菌、酵母或真菌污染等。
如何解決pH值降低的問題?
①及時傳代、提高傳代比例或降低血清量;
②適當(dāng)松開瓶蓋;
③增加培養(yǎng)液中NaHCO3濃度或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度(NaHCO3含量在2.0g/L到3.7g/L之間時,對應(yīng)的CO2濃度為5~10%);
④若是微生物污染造成的,需及時丟棄培養(yǎng)基,并對操作、培養(yǎng)空間進(jìn)行消毒處理。
在什么情況下選擇HEPES緩沖體系呢?
在開放式培養(yǎng)條件下(非5%CO2的培養(yǎng)環(huán)境),細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2迅速溢出,pH迅速升高,使用HEPES緩沖液體系,可以防止培養(yǎng)基pH值迅速變動。